（1） 流式细胞仪(Flow Cytometer)：
是集光电子物理，光电测量，计算机，细胞荧光化学，单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。
（2）流式细胞术(Flow Cytometry)：
利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行多参数、快速（每秒可达1000-10000个）的定量分析和分选（纯度可达99%以上）的技术。
2、流式细胞仪的基本结构
流式细胞仪一般包括如下系统组成：激光光源及光束形成系统，流动室及液流驱动系统，光学系统，信号检测与分析系统，电路，存储、显示及分析系统，细胞分选系统。
二、移植前应用－诊断（白血病免疫分型）
白血病免疫分型是白血病分型的重要指标，是白血病诊断MICM标准的重要组成部分。白血病免疫分型有利于对白血病发育、白血病细胞分化进行深入地了解，因此不仅对临床诊断，而且对于制定临床治疗方案具有指导作用。 近年来白血病细胞免疫特性的研究进展很快，特别是单克隆抗体在临床上应用，不仅可确区分ALL与ANLL，且可进一步将ALL分成若干亚型，可精确了解被测白血病细胞的分化发育阶段，从而有助于临床分型、鉴别诊断、判断预后、指导治疗等。
1、白血病免疫分型检测
（1）材料方法
试剂：单抗
B系：cyCD79a、CD19、CD5、CD20、CD10、Kappa/lambda。
T系：cyCD3、CD4、CD8、CD2、CD3。 NK：CD16、CD56。
髓系：cMPO、CD33、CD13、CD64、CD14。
共表达：CD38、CD34、CD7、HLA-DR。
仪器：BECKMAN-COULTER EPICS-XL 试剂：溶血素、PBS缓冲液。
（2）操作步骤
1）细胞膜表面抗原
首先准备所需的管，并在管上标记上欲加入的抗体，每管中加入5μl CD45-PC5抗体。然后，按管上的标记，加入相应抗体各10 μl (注意：必须是FITC和PE标记的抗体搭配)。各管中加入标本(骨髓或外周血)30～100μl (根据细胞的多少决定)，振荡混匀，室温避光20～30分钟。最后，溶血。
2）细胞浆和核抗原
准备所需的管，并在管上标记上欲加入的抗体，其中一管是同型对照。首先每管中加入 标本(骨髓或外周血)100ul(根据细胞的多少决定)，5ulCD45-PC5抗体；室温避光20分钟。每管中加入固定液100ul，剧烈振荡混匀，室温避光15分钟。各管中加入PBS 4ml，300g离心5分钟后，弃去上清液，振荡混匀(1500r/min*5min)。各管中加入透膜剂100ul，轻轻混匀，室温避光5分钟。加抗体，阴性对照管中加入10ul，其余各管加入相应抗体各10ul，室温避光15分钟。各管中加入4ml PBS，振荡混匀。300g离心5分钟后，弃去上清液。各管中加入PBS500ul，振荡混匀。上机测样。
（3）结果
1）ALL
B-ALL：cCD79a CD34, HLA-DR, CD19, CD10+/- , CD5+/-
T-ALL：CD34, CD38, CD7, CD2+/-, cCD3
NK：CD16、CD56
ALL伴髓系单抗表达的主要是：CD33、CD13
2）AML
cMPO(部分可不表达）
粒系：CD13、CD33、弱表达CD64
单核系：CD64、CD14、CD15
早期细胞表达：CD34、CD38、HLA-DR、CD7
AML伴淋系表达的单抗主要是CD19。
3）混合性白血病
随着近年来外周血造血干细胞移植病例的日益增多，外周血造血干细胞的流式定量越来越成为一个突出的话题。如何准确地定量干细胞数量，什么是有效的质量控制成了各大实验室的话题。1989年，欧洲人创建了米兰方案，利用SS与CD34作双参数直方图，计算CD34阳性细胞数；同年，北欧人改进了米兰方案，加入了对照，称之米兰/北欧方案。
1995年，血液病治疗及移植国际联合会(the International Society of Hematotherapy and Graft Engineering，ISHAGE)成立了干细胞绝对计数(Enumeration)小组，致力于寻求一种简单、快速、灵敏的流式细胞仪检测方法去定量外周血中的造血干细胞数量。这一方法对于临床实验室中不同的流式细胞仪都有效，而且在不同的移植中心具有可比性。这一方案即在96年问世的ISHAGE方案，至今为止，其他各种方案改进均以此方案为基础。
1. 计数检测
MNC计数 标本为外周血单个核细胞采集物（PBSC），用白细胞稀释液即1％的冰醋酸稀释100倍（根据细胞数决定稀释倍数），充池，显微镜下计数。
材料方法：
单抗：
CD34/CD38
CD45/CD4CD8/CD3
CD45/CD56/CD19/CD3
CD86/CD11c/HLA-DR
试剂：溶血素，PBS缓冲液
操作步骤： 按照要求，分别向已编好号的试管中加入10 ml单克隆抗体和同型对照。分别向试管中加入混匀的100 ml抗凝血。混匀，避光，室温孵育20-30分钟。
溶血；上机检测。 检测： 同型对照调整，电压调节使阳性溢出控制在1％以内。调整好对照后，样本测定。电压不能再动，调节补偿，使细胞群的分布合理。
目前把CD34作为造血干细胞的主要标志，CD34阳性细胞计数作为造血干细胞水平定量的检测方法。
2. PBMC细胞亚群分析
1）T细胞亚群分析
以CD45圈门，对单个核细胞群分析，检测其中Th(CD3+ CD4+ ),Ts(CD3+ CD8+ ), Υ/δT 细胞（CD3+ CD4- CD8- )的比例。
2）B、NK细胞分析
同理，以CD45圈门，对单个核细胞群分析，检测其中NK细胞（CD3- CD56+ )、B细胞（CD3- CD19 +)的比例。
四、移植后－免疫功能分析和白血病微小残留检测
1. 免疫功能分析
1）淋巴细胞亚群分析
材料方法：
单抗：
CD4/CD8/CD3
CD3/CD19/CD56
CD3/HLA-DR
CD3/CD4/CD25
CD45RA/CD45RO
试剂：溶血素，PBS缓冲液。
操作步骤：按照要求，分别向已编好号的试管中加入10/20 ul单克隆抗体和同型对照；分别向试管中加入混匀的100u1抗凝血；混匀，避光，室温孵育20-30分钟；溶血；上机检测。
2）Th亚群分析
细胞培养与染色：取500ul抗凝血加入lOul CD4-PC5单抗，室温避光孵育30分钟，RPMIl640洗涤一次，将细胞加入培养体系中，5％C02 37℃孵育至少4小时，取出后以PBS洗一次。用专用细胞内因子试剂进行细胞固定、透膜。将细胞分成两管，其一为测定管加入lOul抗人IL-4-PE和IFN-γ-FITC，另一管加入同型对照，室温避光20分钟，PBS洗涤一次，待测。
流式细胞仪测定：打开流式细胞仪及氩激光光源(488nm)预热20min，同时仪器自动初始化；依次检测标本，每份标本检测50000以上细胞，在前向散射光(FS)和测向散射光(SSC)散点图中圈定淋巴细胞群，然后分析CD4阳性细胞中IL-4-PE和IFN-γ-FI。
2.白血病微小残留检测
白血病经过治疗缓解后，基于骨髓形态学的急性白血病完全缓解（CR）的经典定义下仍有5％以下的原始细胞存在。因此，其仅提供了治疗效果的表面信息，因为只有少部分的患者不能达到形态学缓解。而在获得缓解的病人中，形态学不能区分高复发危险和预后良好的患者。初治白血病患者体内白血病细胞总数约1012－1013，诱导CR后残留的白血病细胞高达108－1010。因此，微小残留病灶（MRD）是白血病复发的根源。早期探测MRD，可避免复发，延长缓解期。
流式检测MRD的特点：灵敏度高，10-3－10-4；适用范围广；优点：可适用于大多数患者；相对便宜；迅速，1－2天；缺点：灵敏度有限；可能发生免疫表型转换；每个患者需两个异常表型。