yatao 2011年05月08日
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流式细胞仪在白血病诊断的应用(2)

s. FL, Scatter vs.FL等,散射光与荧光参数的综合分析常常能提供有效的信息。
⑵ 分析步骤:首先分析所有细胞的抗原表达情况,鉴别出正常细胞和异常细胞群体,正常细胞的表现可以作为整个实验染色过程的内部参照,提供实验一致性与否的客观证据,异常细胞则通过进一步设门分析确定表型特点。
⑶ 设门:即选择特殊的细胞群体分析其各个参数的表现,是一个基本的分析技巧。把分析局限在门内的细胞群体的前提是门内的细胞代表所有感兴趣的细胞,而且没有其他细胞的污染。一般来说,不同疾病的设门策略亦不同,常用的FSC vs. SSC的设门方式可能不总是适用于L&L分析,如在急性白血病中,CD45和SSC的双参数显示是鉴别幼稚细胞的一个简单而有效的方法;在B细胞淋巴瘤中用一个全B细胞的抗体设门来看抗κ链和抗λ链的表现;T细胞淋巴瘤时用一个全T细胞抗体设门使肿瘤细胞的分型更加明确。另外,通过细胞特异的抗原表达确定其光散射区域的"backgate"的方法也很实用,如通过CD14vs.CD45的双参数分析区分多个区域的淋巴、单核和粒细胞群体。
⑷ 分析异常细胞群体:确定异常细胞群体后要进一步分析其免疫分型。分析抗原表达要注意:
①在 L&L中,定性的描述(阳性或阴性)通常要比阳性百分率的计算更有价值。只有在设门内细胞全部是感兴趣的细胞而且荧光分布的形状可以非常清楚地区分阳性和阴性亚群的情况下,阳性百分率才有意义。当然,在某些抗原异质表达的群体中,可进行定性或定量的分析(X% 幼稚细胞CDX阳性);百分率也可用于描述异常和正常细胞的比例。
②评估抗原表达强度是分析的重要组成部分。对于一个特异的抗体而言,荧光强度是抗原密度的反映,同时也与所用的荧光素和独特的荧光素抗体复合物有关。有时确认异常群体是因为没有表达应该表达的抗原,但有时只能从抗原表达的异常强度来判断。如用一些髓性抗原CD14,CD33,CDw65的相对表达强度和散射光特征一起来确认单核细胞系和粒细胞系的发展成熟过程。荧光强度的评估在大多数情况下可以采用定性的资料,但由于试剂和机器上的不同,仅仅基于荧光道数的简单标准可能并不足够,最好以其在相同条件下相对正常细胞的强度来表示。如CD45,CD8或CD38等在不同细胞上的表达密度相差几个对数范围,CD22或CD4等抗原则在所谓阳性范围内在不同细胞类型上的区别较小。
③区分弱阳性和阴性群体:在某些情况下对诊断有较大的价值,如B细胞恶性肿瘤的CD5弱表达,但弱表达的判断却常常很难。现行的标准如"20%阳性"等都仍是人为的标准。依照直方图上与对照组相比向右移动来判断阳性所需的最小位移也是人为的标准。可用K-S统计来比较直方图的区别。亦可选用强的荧光染料,或用过量未标的抗体阻断非特异染色,从而判断弱阳性染色的特异与否。
6. 数据解释
虽然对流式免疫分型结果的解释最好与形态学结果综合考虑,但流式的作用仍远远多于对形态学结果的简单证实。流式可能帮助形态学确认某些诊断,也可能提出之前没有考虑的诊断,甚至在一些典型表现下流式免疫分型可以在其他方法的辅助下诊断疾病,但应尽量解释任何流式结果和其他方法结果上的不一致,流式结果应与临床、形态学、细胞遗传等其他方法综合考虑。

治疗血液病是一个需要坚定信念并且持之以恒的过程 希望患者能树立正确的治疗观念坚持就会胜利!!!!袁六妮